Trieurs
Trois trieurs haute vitesse à configuration optique diverse
Trois trieurs à haute vitesse sont à disposition des utilisateurs. Ces derniers permettent de collecter 4 populations simultanément ainsi que de cloner en plaques 96 ou 384 puits. Il est également possible de trier sous enceinte stérile.
ARIA II SORP
5 lasers : 355 nm, 405 nm, 488 nm, 561 nm, 633 nm.
15 paramètres
Module de clonage
BioRad S3
2 lasers : 488 nm, 561 nm.
4 paramètres
Aria FUSION
L’ARIA FUSION est placé sous une hotte à flux laminaire et permet ainsi de réaliser des tris stériles tout en assurant une protection tant pour les utilisateurs que pour les échantillons.
4 lasers : 405 nm, 488 nm, 561 nm, 633 nm.
16 paramètres
Module de clonage
Tri stérile sous hotte Bioprotect IV
Aria FUSION 2022
5 Lasers : 355nm-405nm-488nm-561nm-640nm
18 Paramètres
Cloneur
Contact
Pour réaliser une demande de prestation, il vous suffit de remplir le formulaire ci-dessous et de nous l'envoyer à l'adresse groupe-tricel@igbmc.fr.
Vitesse de tri
Combien de temps me faut-il pour trier ?
- Pour la plupart des cellules primaires : On utilisera une buse de 70 µm et la vitesse moyenne de tri est de 50 x 106 cellules par heure.
- Pour les lignées cellulaires en culture : il faudra utiliser une buse de 100µm. La vitesse moyenne de tri sera donc de 10 x 106 cellules par heure.
Exemple :
Si vous voulez trier une population exprimée à 5% par l’échantillon au départ, la viabilité étant de 90%, vous aimeriez récupérer plus de 106 cellules, il faudra avoir 40 x106 cellules au départ et le tri durera environ 2 heures minimum.
Il faut également rajouter dans tous les cas 45 minutes supplémentaires pour le temps de préparation de la machine et les temps de lavage.
A noter :
4 populations distinctes peuvent être récupérées en même temps sur les trieurs Becton Dickinson.
2 populations distinctes peuvent être récupérées avec le trieur Bio-rad.
N.B Il est impératif de filtrer tout échantillon avant tri !
Informations pour le tri cellulaire
Contrôles nécessaires pour un tri
- Contrôle de cellules non marquées :
- Contrôle Négatif
- Contrôles de compensation si nécessaire
Echantillon de tri
Amener les échantillons dans des tubes 12 x 75 mm stériles avec bouchon (tubes polypropylene or polystyrene), Eppendorf ou Falcon 15ml avec maximum de 5% serum.
Un volume de 500µL est suffisant pour les contrôles, avec un minimum de 300,000 cellules.
Les échantillons sont à resuspendre à une concentration de 10-50 x106 cellules/ml.
Tubes de récolte de cellules
(4 populations distinctes peuvent être récupérées en même temps)
Pour chaque tube, remplir au ¼ avec le milieu de récupération adéquat.
Vous pouvez utiliser des tubes de 12x75mm, Eppendorf ou Falcon 15 ml.
Les cellules triées avec une buse de 70 microns sont à une concentration ~106 cellules/ml.
Les cellules triées avec une buse de 1000 microns sont à une concentration ~250,000 cellules/ml.
Pensez à ramener suffisamment de tubes de collection pour chaque population.
Après le Tri
Pour optimiser le rendement cellulaire, remplissez les tubes de collection et centrifuger.