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Cytométrie en flux

Cytométrie en flux

RESPONSABLE DE SERVICE

Claudine EBEL

Le service de cytométrie en flux permet de réaliser des analyses multiparamétriques sur des éléments (cellules, particules, constituants cellulaires…) présents dans une suspension cellulaire et les trier en une ou plusieurs sous-populations en fonction de différents critères (taille relative, granulosité, intensité de fluorescence…). Les nombreuses applications de cette technique de caractérisation individuelle, quantitative et qualitative en font un outil indispensable pour la recherche en biologie cellulaire.

 

Ce service est ouvert aux chercheurs de l’IGBMC et à l’ensemble de la communauté scientifique locale. Un équipement de pointe comprenant des analyseurs et des trieurs de cellules avec différentes configurations optiques ainsi que l’expertise de son personnel à travers les conseils, assistance et formation des utilisateurs forment les conditions optimales pour la mise en œuvre des projets de recherche. La complémentarité des plateformes CYTOMETRIE et GENOMEAST présentes sur site offrent un réel plus aux utilisateurs pour le traitement de leurs échantillons. C'est pourquoi, la plateforme est unique dans la région.

PRESTATIONS

Le service de cytométrie en flux met à disposition son expertise dans différents domaines pour répondre aux besoins de ses utilisateurs. Pour cela, il :

  • réalise des analyses multi paramétriques et des tris cellulaires à partir de suspensions cellulaires.
  • met à disposition des chercheurs un opérateur dédié aux tris de cellules
  • forme les nouveaux utilisateurs sur les analyseurs ou trieurs de cellules ainsi que sur les logiciels de cytométrie pour l’analyse des données.
  • tient un rôle de support technique dans la mise en place de nouveaux protocoles et propose une assistance pour l’analyse des fichiers.
  • assure une veille technologique et l’entretien quotidien des instruments afin d‘en garantir le bon fonctionnement.
  • met à la disposition des chercheurs de l’IGBMC certains marqueurs de viabilité comme l’IP, le 7AAD, le Topro, le DAPI, le Hoechst.
  • propose un service d’immunophénotypage à façon pour la caractérisation des populations immunitaires murines dans la rate, thymus ou moelle osseuse.

RESSOURCES

Analyseurs

Dans notre service, nous réalisons des analyses de cellules. Voici les équipements que nous mettons à votre disposition.

Trieurs

Dans notre service, nous proposons de trier vos cellules. Voici les équipements que nous mettons à votre disposition.

Actualités

Claudine Ebel, responsable du service de Cytométrie en flux

Dirigé par Claudine Ebel, le service de Cytométrie en flux analyse et trie les échantillons des scientifiques depuis plus de 25 ans à l’IGBMC. Avec…

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Principes de la cytométrie en flux

La Cytométrie en flux est une technique, quelque peu analogue à la microscopie fluorescente, au cours de laquelle des particules (des cellules) en suspension liquide passent une à une devant un faisceau laser à une concentration pouvant aller jusqu'à plusieurs milliers de particules par seconde.

Cette technique permet de mesurer la lumière diffractée et la fluorescence émises par les particules.


Le Tri de cellules est une option complémentaire de l’analyse réalisée de façon courante dans notre service. Les particules (des cellules) sont séparées sur des critères spécifiques de taille ou de fluorescence mesurés par cytométrie en flux. Les cellules récupérées au cours du tri sont viables et peuvent être recueillies dans des conditions stériles soit en tubes ou directement dans des plaques de microtitration.


Les échantillons triés présentent une pureté supérieure à 95%.

Que mesure-t-on en Cytométrie en Flux?

Les particules passent devant une ou plusieurs sources lumineuses (en général des rayons laser) et émettent un signal lumineux qui peut être fluorescent. Ce signal est mesuré grâce aux détecteurs et aux filtres optiques spécifiques pour chaque fluorochrome. Les caractéristiques physiques et propriétés fluorescentes constituent les principaux paramètres mesurés des particules.
Les paramètres mesurés des cellules sont tant physiques que chimiques.

 

Applications de la cytométrie en Flux

Les applications sont nombreuses. Ci-dessous quelques exemples de mesures faites grâce à la cytométrie en flux.

  • Analyse ADN / Cycle Cellulaire  
  • Apoptose (marquage AnnexinV, Caspases,Tunnel assay etc… )
  • Prolifération Cellulaire (CFSE)
  • Viabilité Cellulaire
  • Mesures de sénescence
  • Expression des gènes via les constructions avec les protéines fluorescentes rapportrices telles que la GFP, mCherry, tdTomato ou autres
  • Flux intracellulaire ionique (Ca+)
  • Phénotypage multiparamétrique (jusque 20 fluorochromes mesurés simultanément)
  • Marquage de surface,intracellulaire et nucléaire
  • Analyses de cellules souches
  • Tri Cellulaire
  • Clonage cellulaire en plaque de microtitration

Accès au service

Pour accéder au service, merci de prendre connaissance de la charte d'utilisation.

Pour réaliser une demande de prestation, il vous suffit de remplir le formulaire ci-dessous et de nous l'envoyer à l'adresse groupe-tricel@igbmc.fr.

Utilisateurs externes

Merci de remplir ce document : Autorisation Externe    

Horaires

Lundi au Vendredi – présence d’un opérateur      9 :00 – 18 :00
Les heures d’ouverture peuvent être modulables au cas par cas (prévenir 24 heures à l’avance) pour les expériences particulières.


Réservations   

Téléphone : 3427 ou 3428

Mail : groupe-tricel@igbmc.fr

Pour les expériences nécessitant la présence d’un opérateur, pensez à prendre contact  avec le service pour programmer votre expérience.

Utilisateurs internes

Utilisateurs formés

Horaires

Les utilisateurs formés ont accès aux instruments 24hr/24hr

Réservations

Réservation online des cytomètres via OUTLOOK

Utilisateurs non formés

Horaires

Lundi au Vendredi – présence d’un opérateur de 9 :00 à 18 :00

Réservations

Pour les expériences nécessitant la présence d’un opérateur,prendre contact  avec le service pour programmer votre expérience.

Sites Internet utiles

Ces sites proposent des informations sur l’utilisation des fluorochromes.
www.bdbiosciences.com/en-fr/resources/bd-spectrum-viewer
www.thermofisher.com/order/fluorescence-spectraviewer

Ce site fournit des liens très utiles ainsi qu’un groupe de discussion par le biais du quel vous pouvez poser des questions ou émettre des commentaires (voir the “Cytometry E-mail” link).
www.cyto.purdue.edu

Ce site web vous propose des protocoles de couplage et de marquage polychromatique du Dr. Mario Roederer, un expert en cytométrie en flux multi couleurs.

www.drmr.com/compensation/index.html

Ce site regroupe une série d’»OMIP » (Optimised Multicolor Immunofluorescence Panels)
Le but de ces publications en ligne est de permettre au chercheur d’avoir accès rapidement à des panels d’exploration prédéfinis.
Ces « OMIP » peuvent constituer le point de départ pour la mise en place de nouveaux panelsd’étude.
medicine.uiowa.edu/flowcytometry/resources/omips-optimized-panels

Publications