Contact

Microscopie électronique

Microscopie électronique

RESPONSABLE DE PLATEAU

Alexandre DURAND

Nous fournissons l’accès aux dernières technologies de pointe pour l’observation des mécanismes biologiques par la microscopie électronique.


La plateforme de microscopie électronique est une plateforme ouverte, membre de l’infrastructure FRISBI, INSTRUCT-ERIC et iNext-Discoverry, fournissant un accès aux équipements et aux méthodes de microscope électronique à la communauté scientifique française et européenne.

 

De l’échantillon à la structure

La plateforme fournit l’accès à plusieurs microscopes électroniques de dernière génération, et offre son expertise sur toutes les techniques associées à la réalisation d’un projet par les méthodes d’analyse de particules isolées, de tomographie ou diffraction des électrons :

  • Préparation de l’échantillon pour son observation aux microscopes électroniques ;
  • Pilotage des équipements ;
  • Analyse préliminaire et interprétation des données pour validation et ajustement des conditions expérimentales ;
  • Traitement et analyse des données pour répondre aux questions biologiques.

Equipements

Titan Kryos

Caractéristiques principales :

  1. S-FEG opéré à 300 kV ;
  2. Correcteur d’aberration sphérique ;
  3. Détecteurs directs d’électron Falcon 3 et K3 ;
  4. Filtre à énergie BioQuantum ;
  5. Phase plate ;
  6. Portoir d’échantillon rotatif sur deux axes.

Le Titan Krios est le microscope électronique le plus performant pour l’observation d’échantillon biologique à haute résolution. Il est équipé d’un autoloader permettant l’introduction et la manipulation de 12 échantillons de manière automatisée. Il bénéficie des dernières technologies d’augmentation du contraste, tel que les phases plates et le filtre à énergie. Sa grande stabilité permet de collecter des données à haute résolution sur de longue session, de manière automatique grâce au logiciel de pilotage SerialEM.

Glacios

Caractéristiques principales :

  1. X-FEG opéré à 200 kV ;
  2. Détecteurs directs d’électron K2 Summit ;
  3. CETA-D pour la diffraction d’électron.

Le Glacios est un appareil compact mais extrêmement performant. Il est équipé d’un système de chargement identique à celui du Titan, ce qui le rend idéal pour le screening des échantillons cryogéniques à haut débit. Ses excellentes propriétés optiques et sa grande stabilité en font également un microscope de premier plan pour la collecte de données à haute résolution.

Le Glacios est équipé d’une caméra CETA-D optimisée pour l’enregistrement de données de diffraction électronique sur des microcristaux de protéines.

Tecnai F20

Caractéristiques principales :

  1. FEG opéré à 200 kV
  2. Caméra Gatan CCD 2K

LeTF20 est un microscope performant, utilisé pour l’observation rapide des échantillons en coloration négative ou cryogénique.

 

 

Vitrobot MkIV

Le Vitrobot est un automate de congélation pour la vitrification des grilles de microscopie électronique cryogénique, permettant de congeler rapidement et de manière reproductible des grilles pour l’observation en microscopie électronique cryogénique.

Services

Préparation des échantillons

Un échantillon de grande qualité est prérequis à l’obtention de données haute résolution en microscopie électronique cryogénique. La plateforme possède un large panel de grille support (Quantifoil, C-flat, UltraFoil, grilles or fonctionnalisées, support d’oxide de graphene) afin d’optimiser la dispersion des particules et l’épaisseur de glace de d’échantillon. La plateforme assure également la production de grilles d’affinité, permettant la congélation d’échantillon peu concentrée ou difficile (fragile, de petite taille, etc…).

Criblage

Afin de déterminer les conditions optimales pour la préparation des échantillons, il peut être nécessaire de tester de nombreuses conditions de congélation différentes. Chaque grille doit être contrôlé par une observation directe en condition cryogénique afin d’être validée.
Le criblage des grilles est effectué sur un microscope Glacios, possédant un système automatisé de chargement des échantillons, afin de permettre le criblage à haut débit tout en limitant les risques de perte ou de contamination des échantillons. Ce système est identique au Titan Krios, permettant un transfert sûr et immédiat des échantillons prometteurs pour la collecte à haute résolution.

Collecte et traitement des données

Nos microscopes sont équipés de détecteurs directs d’électron très sensibles, permettant la collecte rapide de données haute résolution à faible dose. Les conditions d’acquisition ont été optimisé afin de produire un large jeu de données rapidement. Ainsi, plus de 12000 images peuvent être produite sur une session de 2 jours. Ces données sont analysées à la volée afin d’optimiser les conditions expérimentales en cours de collecte.

Formation

La plateforme encadre les utilisateurs au cours de leurs projets et assure leur formation au besoin sur la préparation, le contrôle des équipements ou le traitement des données.